Naslov Izražaj čimbenika epitelno-mezenhimske tranzicije tijekom razvoja bubrega i u bolesnika s nefrotskim sindromom
Naslov (engleski) Expression of epithelial-mesenchymal transition factors during kidney development and in patients with nephrotic syndrome
Autor Marin Ogorevc
Mentor Snježana Mardešić (mentor)
Član povjerenstva Merica Glavina Durdov (predsjednik povjerenstva)
Član povjerenstva Hrvoje Šošić (član povjerenstva)
Član povjerenstva Adela Arapović (član povjerenstva)
Ustanova koja je dodijelila akademski / stručni stupanj Sveučilište u Splitu Medicinski fakultet Split
Datum i država obrane 2024-02-28, Hrvatska
Znanstveno / umjetničko područje, polje i grana BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO Temeljne medicinske znanosti
Univerzalna decimalna klasifikacija (UDC ) 61 - Medicina
Sažetak U razvoju ljudskog bubrega stanice proksimalnog dijela nefrona postupno se diferenciraju u podocite i parijetalne epitelne stanice (PES). Podociti su terminalno diferencirane stanice koje imaju ključnu ulogu u normalnoj funkciji bubrega, a oštećeni su u glomerulopatijama. Mogućnost njihove regeneracije ili zamijene staničnom populacijom poput PES-a bila bi ključna u liječenju glomerularnih bolesti, posebno podocitopatija kao što je fokalna segmentalna glomeruloskleroza (FSGS). U ovom radu istražili smo razvoj podocita i PES-a u fetalnom bubregu, postnatalno u zdravom bubregu i u ispitanika s kongenitalnim nefrotskim sindromom finskog tipa (CNF) i idiopatskom FSGS-om analizom biljega stanične proliferacije, epitelno-mezenhimalne tranzicije (EMT) i biljega tipičnih za nezrele i zrele podocite. U uzorku je tkivo 20 humanih bubrega u razvoju, postnatalnih bubrega i bubrega ispitanika s CNF-om i FSGS-om. Urađeno je imunofluorescencijsko bojenje na biljeg proliferacije (Ki-67) i biljege EMT-e (WNT4, NOTCH2, JAGGED1 i SNAIL) te biljege podocita (nestin, sinaptopodin, nefrin) za dokaz sastava citoplazmatskih nastavaka koji premoštavaju mokraćni prostor. Ultrastruktura premoštavajućih citoplazmatskih nastavaka analizirana je na preparatima priređenim za elektronsku mikroskopiju. U bubrezima u razvoju PES imaju veću stopu proliferacije nego podociti. Nestin je izražen samo u podocitima. U ranom fetalnom razdoblju izraženi su svi biljezi EMT-e. U kasnijem fetalnom razdoblju u podocitima je umjereno, a u PES-ama značajno povećan izražaj WNT4, NOTCH2 i JAGGED1, a u PES-ama i izražaj SNAIL. U postnatalnom bubregu se taj izražaj više ne nalazi. U ispitanika s CNF-om i ispitanika s FSGS-om, izražaj WNT4 je smanjen u podocitima i PES-ama, izražaj NOTCH2 u ispitanika s FSGS-om i izražaj JAGGED1 u ispitanika s CNF-om. Izražaj SNAIL je povećan u podocitima i PES u obje skupine ispitanika, izražaj NOTCH2 povećan u ispitanika s CNF-om, a izražaj JAGGED1 u ispitanika s FSGS-om. Imunofluorescencijom i elektronskom mikroskopijom prikazani su citoplazmatski izdanci koji premoštavaju mokraćni prostor između podocita i PES-a u fetalnim i postnatalnim bubrezima. Imunohistokemijski citoplazmatski izdanci izražavaju biljege podocita. Ispitanici s CNF-om i ispitanici s FSGS-om imaju mnogobrojne premoštavajuće citoplazmatske izdanke i u njima izražene sve analizirane proteine. Mehanizmi kontrole izražaja gena tijekom nefrogeneze reaktiviraju se u patološkim stanjima pa bi njihovo daljnje istraživanje moglo uputiti na mehanizam indukcije regeneracije podocita iz PES-a.
Sažetak (engleski) During human kidney development, the cells of the proximal part of the nephron gradually differentiate into podocytes and parietal epithelial cells (PECs). Podocytes are terminally differentiated cells that play a key role in normal kidney function, and are damaged in glomerulopathies. The possibility of their regeneration or replacement with a cell population like PECs would be crucial in the treatment of glomerular diseases, especially podocytopathies such as focal segmental glomerulosclerosis (FSGS). In this paper, we investigated the development of podocytes and PECs in the fetal kidney, postnatally in the healthy kidney and in patients with congenital nephrotic syndrome of the Finnish type (CNF) and idiopathic FSGS by analyzing markers of cell proliferation and epithelial-mesenchymal transition (EMT) and markers typical for immature and mature podocytes. Our sample contains tissue from 20 developing human kidneys, postnatal kidneys and kidneys from patients with CNF and FSGS. Immunofluorescence staining for the proliferation marker (Ki-67) and EMT markers (WNT4, NOTCH2, JAGGED1, and SNAIL) and podocyte markers (nestin, synaptopodin, nephrin) was performed to prove the composition of the cytoplasmic extensions bridging the urinary space. The ultrastructure of bridging cytoplasmic appendages was analyzed on samples prepared for electron microscopy. In the developing kidney, PECs have a higher proliferation rate than podocytes. Nestin is expressed only in podocytes. In the early fetal period, all markers of EMT are expressed. In the later fetal period, the expression of WNT4, NOTCH2 and JAGGED1 was moderately increased in podocytes, and significantly increased in PECs, and the expression of SNAIL was also increased in PECs. This expression is no longer found in the postnatal kidney. The expression of WNT4 was decreased in podocytes and PECs in patients with CNF and patients with FSGS, the expression of NOTCH2 was decreased in patients with FSGS and the expression of JAGGED1 in patients with CNF. The expression of SNAIL was increased in podocytes and PECs in both groups of patients, the expression of NOTCH2 was increased in patients with CNF, and the expression of JAGGED1 in patients with FSGS. Immunofluorescence and electron microscopy showed cellular processes bridging the urinary space between podocytes and PECs in fetal and postnatal kidneys. These cellular bridges express podocyte markers. Patients with CNF and patients with FSGS have numerous bridging cellular processes and all analyzed proteins are expressed in them. Mechanisms of gene expression control during nephrogenesis are reactivated in pathological conditions, so their further investigation could point to the mechanism of podocyte regeneration induction from PECs.
Ključne riječi
bubreg
epitelno-mezenhimalna tranzicija
nefrotski sindrom
Ključne riječi (engleski)
Kidney
Epithelial-Mesenchymal Transition
Nephrotic Syndrome
Jezik hrvatski
URN:NBN urn:nbn:hr:171:892728
Datum promocije 2024
Studijski program Naziv: Biologija novotvorina Vrsta studija: sveučilišni Stupanj studija: poslijediplomski doktorski Akademski / stručni naziv: doktor/doktorica znanosti, područje biomedicine i zdravstvo (dr. sc.)
Vrsta resursa Tekst
Način izrade datoteke Izvorno digitalna
Prava pristupa Otvoreni pristup
Uvjeti korištenja
Repozitorij Repozitorij MEFST
Datum i vrijeme pohrane 2024-03-14 10:56:33