Naslov Stanična i molekulska svojstva imunopatofiziološkog odgovora na bakteriju Legionella longbeachae serogrupe 1 u mišjem modelu : doktorska disertacija Naslov (engleski) The molecular and cell properties of immune responese to Legionella longbeachae serogroup 1 on a mice model Autor Ivana Gobin Mentor Milorad Šuša (mentor)Član povjerenstva Zlatko Trobonjača (predsjednik povjerenstva)Član povjerenstva Smilja Kalenić (član povjerenstva)Član povjerenstva Ivica Pavić (član povjerenstva)Član povjerenstva Milorad Šuša (član povjerenstva)Ustanova koja je dodijelila Sveučilište u Rijeci Datum i država obrane 2008-01-01, Hrvatska Znanstveno / umjetničko BIOMEDICINA I ZDRAVSTVO Univerzalna decimalna klasifikacijaUDC ) 616 - Patologija. Klinička medicina Sažetak Cilj istraživanja: Ispitati mehanizme koji dovode do razvoja sistemske legioneloze te opisati stanične i molekulske mehanizme imunosnog odgovora na Legionella longbeachae infekciju. Pratiti proizvodnju citokina u infekciji s ovom bakterijom. Utvrditi vrstu i zastupljenost pojedinih upalnih stanica u različitim organima tijekom infekcije. Utvrditi da li nedostatak IFNγ R i β 2 mikroglobulinskog lanca utječe na tijek i ishod legioneloze. Materijali i metode: U istraživanju je korišten C57Bl/6 (H-2b haplotip) genetski čisti soj miša te imunodeficijentni IFN-γ R KO i β 2 mikroglobulin KO miševi. Životinje su intratrahealno inokulirane s kliničkim izolatom L. longbeachae serogrupe 1. Praćen je broj bakterija u plućima, jetri, slezeni i bubrezima tijekom infekcije kao i kinetika eliminacije bakterija iz organizma miša. Tkiva su analizirana histološkim i imunohistokemijskim tehnikama. Rađena je i imunofenotipizacija stanica pluća i slezene. Praćena je koncentracija IFN-γ , TNF-α i IL-12 u plućnom tkivu i serumu miševa. Rezultati: Intratrahealna inokulacija 105 CFU L. longbeachae izaziva sistemsko oboljenje u C57Bl/6 miševa. Patohistološke promjene u plućima zaraženih miševa ukazuju na multifokalnu bronhopneumoniju. U upalnom infiltratu u plućima dominiraju GR-1+ i CD11b+ stanice. Treći dan nakon infekcije dolazi do infiltracije NK+, CD8+, CD4+ i B220+ stanica. Diseminacija legionele u jetru , slezenu i bubrege evidentirana je već 24. sat poslije infekcije. U svim navedenim organima dolazi do upalnih promjene sa infiltracijom upalnih stanica, prvenstveno neutrofila i monocita/makrofaga. U miševa inficiranih sa subletalnom dozom (103 CFU) dolazi do eksponencijalnog razmnožavanja legionela u plućima tijekom prva tri dana infekcije, nakon čega slijedi isćiščavanje bakterija. U prva tri dana nakon infekcije u plućima zaraženih miševa dolazi do infiltracije neutrofila (CD11b+ i GR-1+ stanice), makrofaga (CD11b+ stanica), NK stanica (NK1.1.+ stanica) te limfocita T (CD3+ stanice). Stanična infiltracija pluća je praćena povećanom koncentracijom Th1-specifičnih citokina (TNF-α , IFN-γ , i IL-12) u serumu. Imunodeficijentni IFN-γ R KO i β 2 mikroglobulin KO miševi ne uspijevaju kontrolirati infekciju što ukazuje na značaj IFN-γ i funkcionalnih CD8+ stanica u obrani od ove bakterije. Zaključci: Legionella longbeachae je in vivo na mišjem modelu infekcije izrazito virulentna bakterija. Intratrahealna infekcija L. longbeachae u miševa izaziva sistemsko oboljenje. Stanična imunost, odnosno aktivirani makrofagi i CD8+ limfociti T su osnova obrane od ove bakterije. Protektivnu ulogu u obrani od ove bakterije imaju i Th1 citokini TNF-α , IFN-γ , i IL-12.
Sažetak (engleski) Objective: Legionella longbeachae is facultative intracellular bacterium and the leading cause of legioneosis in Australia. The mechanisms of immunological response to this bacterium are unknown. The aim of this study was to describe the mechanisms of immunological response to L. longbeachae infections on cellular and molecular level, on a mice model. We have tested the role of IFN-γR and functional CD8+ cells in knock out mice (IFN-γR KO and β2 microglobulin KO).
Material and Methods: In all of our experiments the C57Bl/6, IFN-γR KO and β2 microglobulin KO mice were used. The mice were intratracheally inoculated with clinical isolate L. longbeachae serogroup 1 (strain D4968). The number of bacteria in the lung, liver, spleen and kidney was determined at different time points after infection. The infected organs were analyzed for histopathology by histochemistry and immunohistochemistry. The concentrations of the IFN-γ, TNF-α and IL-12 were determined in the lung tissues and serums of infected mice by EIA.
Results: Our results showed that infection with 105 CFU of L. longbeachae causes the systemic infection in mice. All infected animals developed the multifocal bronchopneumonia with predominant infiltration of GR-1+ and CD11b+ cells followed by infiltration of NK+, CD8+, CD4+ and B220+ cells at 72 hours after infection. The systemic character of the disease was noticed at 24h after infection with dissemination of the bacteria in the liver, spleen and kidney. The sublethal dose of infection (103 CFU) caused as well the disease with high survival rate and clearance of the bacteria within three weeks. There was an increase in the number of GR-1+ neutrophils, CD11b+ macrophages, NK+ cells and CD3+ lymphocytes in the lungs of infected mice during the first three days. In addition, the concentrations of TNF-α, IFN-γ, IL-12 were significaly increased on the day 1, day 3 or day 7, respectively. The IFN-γR KO mice did not survive the sublethal infection with L. longbeachae while β2 microglobulin KO mice survived the infection but were unable to clear the bacteria from the lungs.
Conclusion: L. longbeachae is a very virulent in C57Bl/6 animal model of infection with high mortality rate due to systemic infection. The cell immunity and Th1 cytokine response plays a crucial role in the defense of L. longbeachae infection. The functional CD8+ lymphocytes and IFN-γR have a key role in protective immunity to L. longbeachae infections.
Ključne riječi
CD8+ limfociti T
legioneloza
miševi
stanična imunost
Th1 citokini
Ključne riječi (engleski)
CD8+ lymphocytes
cell immunity
legionellosis
mice
Th1 cytokines
Jezik hrvatski URN:NBN urn:nbn:hr:188:994461 Studijski program Naziv: Biomedicina URL zapisa u katalogu http://libraries.uniri.hr/cgi-bin/ucat/unilib.cgi?form=D1111205051 Vrsta resursa Tekst Opseg 125 str; 30 cm Način izrade datoteke Izvorno digitalna Prava pristupa Zatvoreni pristup Uvjeti korištenja Repozitorij Repozitorij Sveučilišne knjižnice Rijeka Datum i vrijeme pohrane 2017-01-19 17:18:04
