| Abstract | Prisutnost M-proteina u serumu karakterizira stanje monoklonske gamapatije. Koncentracija M-proteina izravno
korelira s veličinom tumorske mase, osim u vrlo rijetkim slučajevima nesekrecijske bolesti. Detekcija, tipizacija i
kvantifikacija M-proteina nužne su za postavljanje dijagnoze, procjenu rizika progresije i praćenje uspješnosti
terapije. Ograničenja postojećih metoda kvantifikacije serumskoga M-proteina (denzitometrijska i
imunokemijska) razlog su kontinuiranih istraživačkih napora u osmišljavanju novih postupaka koji bi unaprijedili
dijagnostiku i praćenje kliničkoga stanja bolesnika s monoklonskom gamapatijom. Cilj je ovoga istraživanja bio
razviti i evaluirati osmišljeni računski postupak za kvantifikaciju serumskoga M-proteina primjenom
laboratorijskih rezultata kvalitativne metode imunosuptrakcije. Istraživanje je obuhvatilo 133 uzorka bolesnika s
monoklonskom gamapatijom klinički praćenih u Kliničkom bolničkom centru Zagreb. U svim je uzorcima
provedena elektroforeza serumskih proteina, imunofiksacija i imunosuptrakcija te određena koncentracija ukupnih
proteina i pojedinih razreda imunoglobulina G, A i M. Amplituda vrška M-proteina nativnoga uzorka i globulinske
krivulje nakon imunoprecipitacije prepoznate su kao ključni parametri u laboratorijskim rezultatima
imunosuptrakcije. Podatci o amplitudi krivulja su, uz koncentraciju ukupnih proteina, razreda imunoglobulina
uključenoga u sintezu M-proteina i globulina, poslužili kao temelj osmišljenih računskih modela. Utvrđena je vrlo
dobra povezanost deriviranih varijabli AD1nIg, D1Ig, D2Ig i D1nIg temeljenih na podacima iz
imunosuptrakcijskog elferograma s rezultatima uspoređivanih metoda. Podatci iz imunosuptrakcijskog
elferograma o albuminskoj frakciji nisu pridonijeli jačini povezanosti rezultata deriviranih varijabli s rezultatima
postojećih metoda. Dokazana je veća preciznost određivanja koncentracije M-proteina primjenom deriviranih
varijabli u odnosu na denzitometrijsku metodu i nije ovisila o koncentraciji, prisutnosti poliklonske pozadine niti
migracijskom položaju M-proteina.
U ovom je radu istražena i opisana mogućnost umjeravanja rezultata imunosuptrakcije. Najusporediviji rezultati s
postojećim metodama dobiveni su s rezultatima derivirane varijable D1Ig uz najbolje rezultate procjene preciznosti
i točnosti. Dobiveni rezultati upućuju na zaključak da su u računskim modelima za kvantifikaciju M-proteina
amplitude krivulja na mjestu vrška M-proteina u imunosuptrakcijskom elferogramu objektivan i vrijedan mjerljivi
parametar neovisan o prisutnosti pozadine. Evaluacijom deriviranih varijabli pokazano je da je njihovom
primjenom moguće unaprijediti dijagnostiku i praćenje kliničkoga stanja bolesnika s monoklonskom gamapatijom. |
| Abstract (english) | The presence of M-protein in serum characterizes the state of monoclonal gammopathy. M-protein concentration
directly correlates with tumor mass size, except in very rare cases of the nonsecretory disease. Detection, typing,
and quantification of M-protein are necessary for diagnosis, assessment of the risk of progression, and monitoring
the therapy efficiency. The shortcomings of existing methods for M-protein quantification (densitometric and
immunochemical) encourage ongoing research efforts to develop novel procedures that would improve the
management of patients with monoclonal gammopathy. This study aimed to develop and evaluate a computational
procedure for quantifying serum M-protein using laboratory results of a qualitative immunosubtraction method.
The study included 133 samples of patients with monoclonal gammopathy treated at the University Hospital Center
Zagreb. Serum protein electrophoresis, immunofixation, and immunosubtraction were performed in all samples,
and the concentrations of total protein and of individual immunoglobulin classes G, A, and M were determined.
The amplitude of the M-protein spike of the native serum and the globulin curve after immunoprecipitation were
recognized as key parameters in the laboratory results of immunosubtraction. Amplitude data, along with the
concentrations of total protein, immunoglobulin class involved in M-protein synthesis and globulins represent the
basis of explored derived models. A very strong correlation was found between the derived variables AD1nIg,
D1Ig, D2Ig, and D1nIg based on data from the immunosubtraction elpherogram with the results of the compared
methods. Data on the albumin fraction, generated from immunosubtraction elpherogram, did not improve the
correlation. Higher precision of derived variables was demonstrated than in the densitometric method and it was
unaffected by concentration, background presence, or migration pattern of M-protein.
In this research, the concept of immunosubtraction result normalisation has been described and studied. The most
comparable results to both examined methods were obtained with the results of the derived variable D1Ig, with
the best precision and accuracy testing results. The findings of this study imply that the change in amplitude of the
curves at the M-protein spike position in immunosubtraction elpherogram is an objective, backgroundindependent,
measurable, and relevant parameter in M-protein quantification by derived variables. The evaluation
of the derived variables showed that their implementation could improve diagnostics and follow-up of patients
with monoclonal gammopathy. |
